利用曲菌的蛋白發(fā)現(xiàn)系統(tǒng)取得高產(chǎn)脂肪酶

日本不僅重視其特有的生物酒精技術開發(fā)，還很重視與歐洲各國的技術協(xié)作，開發(fā)生物燃燒能源（BDF）技術。BDF的技術開發(fā)歐洲占全世界的90%，該技術在生產(chǎn)中會排出約10%的含堿甘油，這種副產(chǎn)物目前尚無有效的利用途徑。一種固定化酶技術可以使上述情況得到改善，用該技術可得到高純度的甘油，但由于反應過于緩慢尚未達到工業(yè)化的地步，為滿足這一需求，各國正在開發(fā)高活性的固定化酶。

日本利用十分熟悉的食品釀造用絲狀菌ASP.ORYZAR、ASP.NIPGER等曲菌，對其進行遺傳性改良，包括對曲菌—葡糖苷酶基因啟動子的改良和5’UTR（非翻譯區(qū)）*適性的確認等，得到了高活性的脂肪酶。轉(zhuǎn)基因蛋白質(zhì)的得率高低，*重要的是轉(zhuǎn)錄，有必要通過多次反復利用淀粉酶基因中的基點元件而活化轉(zhuǎn)錄。曲菌—葡糖苷酶遺傳基因的啟動子連續(xù)存在著2個被稱為REGION111的區(qū)域，在這里，對各種啟動子12次反復導入REGION111然后對比大腸菌的葡萄糖醛酸酶（GUS）基因，發(fā)現(xiàn)源于ASP.ORYZAR葡糖淀粉酶基因的啟動子活性提高了約4倍，源于ASP.NIPGER NO.8的啟動子提高了6倍。再者，對曲菌的糖酵解基因中*常見的烯醇酶啟動子導入REGION111其啟動子活性提高了20多倍。接下來是通過改變5’UTR進而提高翻譯調(diào)控的效率。在啟動子P_NO8142的下流導入了包含源于PB1221的5’UTR，用它來置換曲菌的糖酵解酶基因的5’UTR，發(fā)現(xiàn)GUS的活性提高了8倍。